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酶標測定儀檢測生鮮乳中三聚氰胺殘留的步驟
作者：admin 時間：2021-05-19 02:08:03 點擊次數:5126
酶聯吸附法測定生鮮乳中三聚氰胺殘留量的方法。用提取液將樣品中三聚氰胺均質振蕩提取。首先將三聚氰胺酶標記物、樣品提取液和標準品加入涂有三聚氰胺抗體的微孔開始反應。在30分鐘的孵育過程中，樣品提取液中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭，與微孔中的三聚氰胺抗體結合。孵育30分鐘后，微孔中所有未結合的三聚氰胺和三聚氰胺酶標記物都被沖洗掉。用去離子水洗滌后，在每孔中加入一種清晰的底物溶液，結合酶標儀將無色底物轉化為藍色物質。孵育30分鐘后停止反應，根據各孔顏色深度讀取數據。根據標準顏色，得到樣品中三聚氰胺的濃度值。
一、酶標儀檢測原料奶中三聚氰胺需要準備的材料:
1. 蒸餾水或去離子水
2. 可以吸收50ul和100ul的移液器和吸頭
3.4000轉離心
4. 吸水性紙或同等的吸水性材料
5. 450海里標
6. 計時器
7. 20mM PBS:自備
8. 清洗液:需自備
二、酶標儀檢測原料奶中三聚氰胺試劑的制備:
1. 20mM PBS: 0.62g na2po4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾水使體積至1000ml
2. 洗滌溶液:0.62g na2po4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾水到定容1000ml。+0.5ml土壤溫度20
三、酶標儀檢測原料奶中三聚氰胺樣品的預處理:原料奶(稀釋比:1)
1. 取鮮奶10ml，冷凍離心10分鐘(或放入冰箱10分鐘，離心10分鐘);
2. 除去上層乳脂，待樣品恢復室溫后，取下層150ul直接測量;
四、酶標檢測儀測定生奶中三聚氰胺的方法:
1. 將所有試劑和樣品放回室溫20-28℃，但時間不要超過24小時;
2. 從鋁箔袋中取出所需數量的微孔條，固定在微孔板架上，將未使用的微孔條與干燥劑一起放入密封袋中存放;
3.用吸管將150ul標準品和樣品吸入相應的微孔。確保每一種溶液都是用干凈的吸管來繪制的，以避免交叉污染。加入每孔加入50ul三聚氰胺酶標記物;
4. 輕輕搖動盤子60秒，20-28攝氏度孵育30分鐘;
5. 將微孔中的溶液倒入水槽中，將清洗液填滿微孔，搖勻棄去，重復三次，共洗盤四次;
6. 清洗一次后，將溶液倒進孔中，然后翻轉微孔板，在吸水紙上輕拍干燥;
7. 每個微孔加入100ul底物溶液;
8. 20-28℃孵育30分鐘;
9. 每個微孔加入100ul停止液;
10. 用萊恩德酶測定標儀在450nm下讀板
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